扬州体外研究D-荧光素钾盐生物公司

    因此只有在活细胞内才会产生长发生光现象，并且发光光强度与标记细胞的数目线性相关。结构与性能荧光素在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应，生成氧化荧光素(oxyluciferin)，并产生长发生光现象。荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的，约一分钟就可以扩散到小鼠全身。荧光素的半衰期约三个小时，只有活细胞才能够持续表达荧光素酶。(1)荧光素不会影响动物的正常生理功能。(2)荧光素是280道尔顿的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障。(3)荧光素在体内扩散速度快，可通过腹腔注射或尾部静脉注射进入动物体内。腹腔注射扩散较慢，持续发光长。荧光素腹腔注射老鼠后约1min后表达荧光素酶的细胞开始发光，10min后强度达到稳定的更高点，在更高点持续约20~30min后开始衰减，约3h后荧光素排除，发光全部消失，更佳检测时间是在注射后15~35min之间；若进行荧光素静脉注射，扩散快，但发光持续时间很短。科研人员根据大量的实验总结出荧光素的合适的用量是150mg/kg，即体重20克的小鼠需要3毫克的荧光素。(4)观察时间的间隔没有更短限制，只要观察的条件控制一致就可以。虽然底物在动物体内有一定的代谢过程。D-荧光素也常用于身体的外部研究。扬州体外研究D-荧光素钾盐生物公司

    可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。荧光素酶报告基因有许多优点：①非放射性；②比CAT及其他报告基因速度快；③比CAT灵敏100倍；④荧光素酶在哺乳细胞中的半衰期为3小时，在植物中的半衰期为3．5小时。由于半衰期短，故启动子的改变会即时导致荧光素酶活性的改变，而荧光素酶不会积累。相反，CAT在哺乳细胞中的半衰期为50小时。荧光素酶浓度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范围内，荧光信号强度与酶浓度成正比。在理想条件下，可检测到l0-20mol/L的荧光素酶。检测步骤：1．用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。2．设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。3．筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。4．扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。5．培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。6．将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。7．提取蛋白并用于荧光素酶检测。8．加入底物，测定荧光素酶的活性。9．计算相对荧光强度，并与空载对照比较。双荧光素酶质粒D-荧光素钾盐适用于哪些领域？

    LAR）Promega公司推出的第一种萤光素酶检测试剂LuciferaseAssaySystem（LAR），为灵敏、非放射性的报告基因检测拉开了序幕。LAR与萤火虫萤光素酶（luc）报告基因一起，为研究人员开始了解基因表达调控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase®报告基因检测系统（DLR）DLR是第一种允许在单个样本中依次检测两个报告基因的试剂。通过允许萤光素酶活性的内部归一化，在提高报告基因检测的可靠性方面取得了关键进展。此外，pGL3报告基因载体系列具有改良后的萤火虫萤光素酶基因，luc+。这个改造一种报告基因以实现性能改进的例子后来被进一步应用到pGL4和luc2报告基因上，通过生物信息学和合成方法，实现了更大的改进。[1]1999ENLITEN®/UltraGlo™重组萤光素酶Promega公司在早期推出的一种重组萤火虫萤光素酶（Enliten）基础上，改造出了一种称为UltraGlo™的热稳定性萤光素酶。UltraGlo™的开发是在各种检测和储藏条件下进行一步法“加样-读数”检测的关键。此后，通过开发新的方法来改变萤火虫萤光素酶检测的信号动力学，例如Bright-Glo™、Steady-Glo®和Dual-Glo®允许使用微孔板进行检测。而“加样-读数”的形式简化了样品处理。

    但是上一次底物的残留曲线可以知道，可以控制对下一次观察结果的影响。储存与运输一般放在-20℃的冰箱即可，半年以上不使用放在-80℃的冰箱，溶解配制后放在4℃冰箱，短期运输放在4℃环境。建议现用现配，D荧光素钾盐在液体中容易降解。应用领域肿大的瘤，干细胞，药物开发，基因治的好，转基因小鼠，免疫学等等。英文名字firefly.中文名称荧光素酶，重组荧光素货号AAT-12500规格￥1430/1mL背景资料：荧光素酶是来自北美萤火虫（Photinuspyralis）中荧光素酶基因的克隆和重组表达，它为实验研究或者用生物荧光试剂制备试剂盒检测ATP或者荧光素底物提供了可信度和可靠性。这种重组酶可以克服由天然资源纯化获得荧光素酶时受季节和地方区域变化的影响。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)，可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。产品形式提供的荧光素酶*重组荧光素*产品为溶液形式。作者：思存链接：zhuanlan./p/来源：知乎著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权，非商业转载请注明出处。做D-荧光素钾盐测试工作液是先用现配。

    是新型底物开发的一个早期实例。[1]2012NanoLuc®萤光素酶基于定向进化和新型底物开发方面的经验，研究人员从虾的萤光素酶改造设计出一种新型萤光素酶报告基因，即NanoLuc®萤光素酶。这是一种小分子（19kDa）单体酶，具有独特的底物，其灵敏度比已具备高灵敏度的萤火虫或海肾萤光素酶系统高约100倍。这种新型的报告基因有着范围广的应用前景，为进一步的技术开发奠定了基础。[1]2015NanoBRET™技术NanoLuc®的小体积和非常明亮的光输出是作为蛋白质标签的理想特征。这些特征还很适合作为生物发光共振能量转移（BRET）的供体。一项针对各种能量受体荧光基团的深入研究发现，红色光谱中的可选择性有助于消除与BRET测定相关的一些挑战。可将这些荧光基团添加到蛋白质配基等分子中以测量靶蛋白的结合，或与HaloTag®配基耦联以进行活细胞中蛋白质：蛋白质相互作用的检测。[1]2016NanoBiT®技术随着NanoLuc®的诞生，Promega的科学家努力将该报告基因改造为多亚基系统，即“NanoLuc®BinaryTechnology”或NanoBiT®。该系统由两部分组成：11个氨基酸的小标签和一个更大，更精细的NanoLuc®亚基，LgBiT。这两部分结构互补结合。D-荧光素盐也算是钠盐和钾盐。扬州体外研究D-荧光素钾盐生物公司

D-荧光素钾盐测试需要满足哪些条件？扬州体外研究D-荧光素钾盐生物公司

    luciferin)的分子结构如右图所示：，在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应，生成氧化荧光素(oxyluciferin)，分子结构如右图所示，并产生长发生光现象。但是该底物荧光素以前大多依赖进口，产品价格昂贵。而且由于该产品容易降解、受潮影响使用效果。所以，需要国产化的方式生产，一方面可以降低成本，一方面可以增强使用效果。作者：科远迪链接：zhuanlan./p/来源：知乎著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权，非商业转载请注明出处。D-luciferin，potassiumsalt荧光素产品说明书发光原理哺乳动物生物发光，一般是将Fireflyluciferase基因（由554个氨基酸构成，约50KD）即荧光素酶基因整合到预期观察的细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株，当细胞分裂、转移、分化时,荧光素酶也会得到持续稳定的表达。基因、细胞和活题动物都可被荧光素酶基因标记。将标记好的细胞接种到实验动物体内后，当外源（腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素(D-luciferin，potassiumsalt，以下均简称荧光素)，即可在几分钟内产生长发生光现象。所发的光波长在540-600nm。这种酶在ATP，氧存在的条件下，催化荧光素的氧化反应才可以发光。扬州体外研究D-荧光素钾盐生物公司